TMT?(Tandem Mass Tag?)是由Thermo Scientific公司研发的多肽体外标记技术,能够采用2-18个稳定同位素标签高效标记来自不同样本的蛋白质酶解产生的肽段。将标记的肽段混合进行质谱检测,在二级质谱中肽段上的TMT标签会优先碎裂产生具有不同质荷比的报告离子信号峰,据此可以获得同一肽段在不同样本中的表达差异。
检测通量
一次性检测6-18个样本,大队列样本需每批加入1-2个相同样本作为内参;
适用范围
擅长复杂样本定量分析,不适用于不同组织器官类型样本混合检测;
重复性好
所有样本混合上机,同时进行质谱检测;
缺失值少
为后续生物信息学分析提供丰富的数据;
注意事项
具有比值压缩效应,蛋白质差异倍数有一定程度压缩。
临床大队列样本的疾病分型、生物标志物发现;生理、病理及感染免疫的机制研究;药物的研发与药效评估
动植物的生长发育、遗传育种及生态保护研究;生物对环境的适应及胁迫抗逆的机制研究;营养与饲料成分的分析与优化
食品营养价值与品质的分析鉴定;产品成分的分析与优化;食品安全的提升
提供timsTOF HT、timsTOF Pro2、Orbitrap Astral、Orbitrap Exploris? 480、Q Exactive HF-X、Orbitrap Eclipse等多种质谱平台选择;
提供DIA、dDIA、LFQ、TMT等多种定量方法选择。
项目经验涵盖多物种、多组织器官类型及多疾病类型,包括:
100+种人类器官、组织、细胞及疾病类型;
60+种小鼠器官、组织、细胞及疾病类型;
60+种医学、农牧领域模式动物及非常见动物样本;
60+种药物、农牧领域模式植物及非常见植物样本;
60+种细菌、真菌等微生物样本。
与100+所医院、研究所等单位建立深度合作;
合作文章累积影响因子300+,发表于多部医学、生物学、植物等领域期刊。
发表期刊:Molecular Plant
影响因子:17.1
发表单位:中国科学院昆明植物研究所
发表时间:2019.12.05
样本类型 | 送样量 | |
动物组织 | 常规组织(脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉等柔软组织) | 20 mg |
坚硬组织(软骨、毛发) | 200 mg | |
植物组织 | 柔软组织(木本植物的叶、花等,草本植物,藻类,蕨类植物) | 300 mg |
坚硬组织(根、树皮、树枝,果实种子等) | 3 g | |
微生物 | 常见细菌、真菌菌体(菌体沉淀)、精细胞 | 50 μL |
细胞 | 悬浮/贴壁培养细胞(细胞计数/沉淀) | 5×106或20 μL |
液体类 | 血浆/血清(不去除高丰度) | 10 μL |
血浆/血清(去除高丰度-伯乐) | 300 μL | |
血浆/血清(去除高丰度-TOP2/TOP14) | 50 μL | |
脑脊液(不去除高丰度) | 200 μL | |
脑脊液(去除高丰度-TOP2/TOP14) | 500 μL | |
卵泡液(不去高丰度) | 200 μL | |
卵泡液(去除高丰度-伯乐)、尿液,精液 | 2 mL | |
淋巴液、关节液、穿刺液、腹水 | 5 mL | |
唾液/泪液/乳汁 | 1 mL | |
培养基上清(不能使用含血清的培养基) | 10 mL | |
FFPE | 每片厚度10 μm,面积1.5×2 cm | 10-15片 |
其他 | 蛋白溶液(最佳Buffer是8M Urea) | 30 μg |
TMT适用于相同组织的相对定量分析,不能进行有或无的鉴定,不能将不同的组织部位一起标记上机,不能将不用物种的样本一起上机,对蛋白总量需求较LFQ高。
TMT试剂标签之间的质量差额在0.006 Da左右,需要质谱二级分辨率在50k以上才能准确分辨出不同的报告离子,因此只有在高分辨质谱仪上才能完成标记定量实验。主流仪器有Thermo fisher公司的 orbitrap系列质谱仪。
Thermo Scientific 串联质谱标签试剂Tandem Mass Tag(TMT) reagents专为通过串联质谱对不同样品中的蛋白质进行鉴定和定量而设计。一组标签试剂里的所有标签均带有相同的质量,由一个胺反应性的NHS 酯基团,间隔臂(质量调整区)和质量报告基团组成。