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Q&A

常见问题

  • 如何从数据质控结果中判断数据的是否正常

    肽段?度分布:肽段过?或过短都?法在质谱仪中被检测到,肽段?度主要分布在7-25之间的数据属于正常状态;

    母离子质量容差分布:肽段?离?的实测分?量和理论分?量的质量偏差分布在0附近,?部分小于10ppm,说明数据正常;

    重复性CV分析:曲线上升越快说明样本整体的重复性越好;?般标记定量:CV=20%时累计蛋?含量达到80%以上为正常状态,?标定量CV=20%时累计蛋?含量达到60%以上为正常状态。


  • group蛋?的定义?

    同?个group的所有蛋?含有相同的肽段(鉴定到的肽段),选择这些蛋白中总序列?度最?的蛋?作为这个group的代表,称为master protein,而每?个group独有的肽段,则称为Unique肽段,“独有肽段”是指该group相对于其他的group 来说所特有的肽段;


  • 数据质控中的FDR值是如何定义的?

    FDR指蛋?容错率。数据库检索的时候?般都会?正库(老师提供的数据库)和反库(数据库序列完全颠倒)分别对数据进?检索,然后对鉴定到的蛋?进?打分(数据库?对的正确率),根据分值?低进?排序。当反库鉴定到的蛋?数量超过5%的时候,剩余分值靠下的蛋?全部删除。以保证我们鉴定到的蛋?可信度保持的95%,且分值较?。


  • 能提供没有比对出蛋?,但是有结构域的短肽序列么?

    不能。蛋?是经过打断成为6-25个氨基酸左右的肽段上质谱的,根据所提供数据库中理论打断的肽段进??对得到的肽段序列,然后根据肽段序列对蛋?进?预测和定量。对于没有比对上蛋?的这些打断的肽段,软件?动就会进?过滤,在搜库结果中不会有任何呈现。可以参看结果?件中的PSM?件,这些肽段都是可以比对的上数据库的可信肽段。至于比不上蛋?的那部分肽段,也有可能是质谱的精度不够导致系统判定不可信,实验中我们会尽量避免这部分肽段的比例,所以这部分也不具单独分析的价值。


  • label-free、iTRAQ/TMT、DIA的定量、定性?法?

    Label free采??级谱图进?定量,二级谱图进?定性;iTRAQ/TMT:采??级谱图定量和定性;DIA:?级谱图定量和定性;


  • 蛋?质定量表中为什么有些蛋?质没有定量信息?在什么情况下才可能出现有定性但?定量的情况?

    可能的原因如下:A、只检测到了?于定性的肽段,?没有检测到可?于定量的唯?肽段,所以?定量数据。这种蛋?质在附表?中显示的unique peptide=0。

    B、肽段被标记上而且被检测到了,但是由于信号值太低,导致信号强度积分数据赋值为零。


  • 是否蛋?覆盖率越高,可信度越??

    结题报告中质控报告部分的蛋?覆盖度分布图中的覆盖度是指某?蛋?鉴定到的所有unique肽段的?度之和占该蛋?全?的?例,?unique肽段是指可以表征某?蛋?的特有的肽段,所以决定蛋白覆盖 度??的因素有两个:蛋白鉴定到的unique肽段?度之和、蛋?的全?;有些蛋?全?较短,当该蛋白的所有unique肽段都鉴定到了,其覆盖度就会很?,也就说明该蛋?的可信度很?;?有些蛋?的全?很?,那么即便该蛋白的所有unique肽段都鉴定到了,其覆盖度依然会较低,所以并不能说这个蛋?的可信度很低,举例说明:蛋?A和蛋白B都有10个unique肽段,每个unique肽段?度均为10aa(10个氨基酸),蛋?A总?度是200aa,蛋?B总?度是1000aa,那么蛋?A和蛋?B都是可信度?常?的蛋白,只是蛋?A的覆盖度=10*10aa/200aa=50% ,蛋白B的覆盖度=10*10aa/1000aa=10%,所以蛋?覆盖度只是?个参考因素,而不是绝对依据。


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